大腸桿菌凍干后的應(yīng)用,大腸桿菌的細(xì)胞提取物進(jìn)行凍干,制成粉末狀的無細(xì)胞蛋白合成體系;對于益生型或工程改造后具有治療功能的大腸桿菌,凍干是將其制成口服菌粉膠囊的關(guān)鍵步驟。
大腸桿菌冷凍干燥的過程:準(zhǔn)備凍干管用蒸餾水沖洗后,121℃滅菌,再配制保護(hù)劑將脫脂奶粉配成10%乳液, 115℃滅菌10min,隨機(jī)抽樣確認(rèn)無菌后方可使用。然后分裝用滅過菌的1ml槍頭吸取加過菌的保護(hù)劑,注入到凍干管中。啟動冷凍真空干燥機(jī)制冷系統(tǒng)。當(dāng)溫度下降到-50℃以下時,將凍結(jié)好的樣品在無菌條件下打開膠蓋封好紗布,迅速放入凍干機(jī)鐘罩內(nèi),啟動真空泵抽氣直至樣品干燥。
大腸桿菌冷凍干燥時重要點:1.收集對數(shù)期中后期或穩(wěn)定期的菌體,活力更佳。有研究指出,初始 OD600 控制在 0.5~0.7 時,凍干粉的物理性狀與存活率較好。2.脫脂奶粉等不耐高溫的成分需注意滅菌方式(如輻照或單獨過濾除菌),避免高溫導(dǎo)致營養(yǎng)成分破壞。3.凍干后殘留水分過高易導(dǎo)致菌體在保藏中死亡,過低也可能損傷部分菌株。對于大腸桿菌,控制合適的殘余水分對長期穩(wěn)定很重要。
提供大腸桿菌凍干保護(hù)劑開發(fā),凍干工藝優(yōu)化,凍干放大生產(chǎn)等。